产品简介

酶法加帽试剂盒包含牛痘病毒加帽酶（Vaccinia Capping Enzyme）、mRNA Cap 2´-O-甲基转移酶（mRNA Cap 2´-O-Methyltransferase）及其他加帽相关组分，可在无帽结构的mRNA 5’端加入cap0或cap1结构。该结构与真核生物体内天然帽结构完全一致，可显著降低外源 mRNA的免疫原性，增强其稳定性，并提高翻译效率。

本试剂盒中的牛痘病毒加帽酶来源于携带牛痘病毒MR的重组大肠杆菌，该酶由D1R、D12L双亚基组成，具有三种酶活性（RNA三磷酸酶活性、鸟苷酸转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性），D1亚基执行RNA三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能，D12亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能，能特异性将7-甲基鸟苷酸帽子结构（Cap 0） 加至RNA的5'端。mRNA Cap 2´-O-甲基转移酶来源于携带有牛痘病毒mRNA Cap 2´-O-甲基转移酶基因的重组大肠杆菌菌株。该酶可以利用S-腺苷甲硫胺酸（SAM）作为甲基供体来甲基化加帽RNA（Cap 0），从而形成Cap 1结构，即在RNA的5´末端紧挨帽结构的第一个核苷酸的2´-O位置上添加一个甲基基团。

Cap 1加帽系统催化四种酶促反应：①RNA三磷酸酶将RNA 5'-三磷酸裂解为二磷酸；②RNA 鸟苷酸转移酶将GTP连接到RNA N1的5'-二磷酸；③鸟嘌呤7-甲基转移酶，使用S-腺苷甲硫氨酸作为辅助因子，催化鸟嘌呤的7-氮甲基化；④mRNA Cap 2'-O-甲基转移酶能在Cap 0-RNA 5′末端紧邻帽结构的第一个核苷酸的2′-O上添加甲基基团。

图1. 牛痘病毒加帽酶与mRNA Cap 2´-O-甲基转移酶参与的mRNA酶法加帽途径

性能优势

本试剂盒一个反应能够为50μg RNA完成加帽，并可放大生产毫克级别的RNA。加帽后mRNA 翻译效率提高，可显著改善mRNA在转染和显微注射实验中的表达。

运输与保存

≤0℃运输；-25℃～-15℃条件下可保存一年；避免反复冻融。