Exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能，有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。吉赛生物自主研发外泌体提取试剂盒，能够快速分离提取exosome RNA进行建库测序，满足外泌体mRNA，lncRNA，circRNA，miRNA的不同研究需求。

外泌体RNA测序技术路线

测序方案

分析对象：mRNA+lncRNA+circRNA

测序平台：Illumina Novaseq 6000/NovaSeq X Plus

测序模式：PE150

测序数据量：10 Gb raw data

分析对象：miRNA

测序平台：Illumina Novaseq 6000

测序模式：PE150

测序数据量：10 M raw reads

生物信息分析

外泌体全转录组测序丨Exo-RNA-seq(mRNA+lncRNA+circRNA)

基础分析

原始数据质控检查

比对结果质控检查

基因覆盖度分析

基于基因表达的样品主成分分析

基因表达分析

circRNA预测及鉴定

长链非编码RNA的识别

高级分析

差异基因表达分析

差异基因GO功能分析

差异基因KEGG通路分析

差异基因Rectome通路分析

针对mRNA基因的GSEA分析

circRNA差异分析

差异circRNA宿主基因的GO功能分析

差异circRNA宿主基因的KEGG通路分析

差异circRNA宿主基因的Rectome通路分析

差异circRNA的靶向miRNA预测分析

差异circRNA及靶向miRNA网络调控制图

长链非编码RNA的识别

长链非编码RNA差异分析

差异lncRNA顺式调控基因的GO功能分析

差异lncRNA顺式调控基因的KEGG通路分析

差异lncRNA顺式调控基因的Rectome通路分析

外泌体miRNA测序丨Exo-miRNA-seq

基础分析

原始数据质控检查

比对结果质控检查

RNA种类分析统计

miRNA表达分析

基于miRNA表达的样品主成分分析

miRNA差异分析

差异 miRNA 靶基因预测

差异 miRNA 靶基因的GO功能分析

差异 miRNA 靶基因的KEGG通路分析

差异 miRNA 靶基因的Rectome通路分析

高级分析

差异miRNA与差异表达基因调控分析

差异miRNA与差异表达基因网络绘图

Table1. 外泌体测序原始样本送样建议

Table2. 外泌体测序样本送样建议

*更具体的送样方法请详询销售或技术支持

物种范围：人、小鼠、大鼠等哺乳动物，拟南芥、水稻、番茄、玉米、大豆等植物，其他物种详询销售或技术支持

Q1：外泌体全转录组测序，提取出来的RNA有100~200ng。是采用微量建库的方法建库，还是常规建库方法建库呢？

A1：如果提取出来的RNA量超过100ng，建议采用常规去rRNA链特异方法，用100ngRNA进行全转录组建库。相对来说，建库input的模板量越大，基因信息的覆盖度越高。微量建库方法是在样本量较少的情况下采用的建库方法，在可以的情况下，尽量采用常规建库方法进行实验。

Q2：外泌体研究，应选用血浆还是血清？

A2：血清是血液凝固之后收集的液体，其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。

血浆=血液-血细胞

血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子

所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，血清更适合。