qRT-PCR试剂盒

吉赛生物提供circRNA qRT-PCR试剂盒，产品包含逆转录和定量PCR检测配套试剂，用于circRNA表达水平及差异的检测分析，同样适用于mRNA以及lncRNA。

本产品的TransScript RT Enzyme (M-MLV) 是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术获得的全新逆转录酶。大幅提高了热稳定性，在50℃的半衰期超过240分钟，并可在55℃长时间反应而保持稳定，非常适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。定量PCR检测的试剂是使用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂。circRNA和lncRNA 的表达水平相对较低，需要摸索多个条件才能优化扩增体系，本产品配合针对qPCR优化的最适Buffer，可以有效抑制非特异扩增，显著提高扩增效率，适用于进行高灵敏度的qPCR反应。

产品特点

1、 试剂盒包含了Oligo dT和随机引物，适用范围广；

2、 针对低拷贝RNA优化的体系扩增效率高，特异性强，灵敏度高；

3、 全方位配套的引物产品及技术服务：吉赛生物依托多年技术经验，已验证circRNA引物1万多对，筛选出特异性引物达2000多对，并建立了“circRNA引物库”，可向研究人员提供引物序列信息，同时可提供‍circRNA qPCR引物设计、circRNA qPCR检测服务，有效保障实验快速成功。

[1] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[2] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[3] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[4] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[5] IF8.886 Effects of long-term culture on the biological characteristics and RNA profiles of human bone-marrow-derived mesenchymal stem cells. Molecular Therapy-Nucleic Acids

A常见问题

1、如何设置溶解曲线的温度？

我们做测试的时候用的是ABI

7500的仪器，溶解曲线的设置都是仪器默认的，所以溶解曲线用仪器默认的即可。

2、GS0202-2试剂盒只能用于circRNA的逆转录吗？

不是的，也可用于普通的mRNA和LncRNA的逆转录。

3、Reverse Transcription Primer中是否均包含Oligo dT和随机引物，还是只包含其中一种引物？

包含了Oligo dT和随机引物。

4、我们的荧光定量PCR试剂盒有哪些优点？

扩增效率高和特异性好。

5、在配置qPCR的反应液时，反应体系为20ul，模板量应加多少合适？

建议用1ug的RNA进行逆转录，逆转录后的产物稀释5-10倍，取2ul cDNA进行qPCR反应。可根据客户的实验要求进行适当的调整。

6、GS0202-2试剂盒可用于cfRNA的逆转录吗？

可以的。

7、GS0202试剂盒的引物设计合成需要我们提供哪些信息？

需要提供种属信息、相关的circRNA ID号和序列。

8、里面master mix中是否可以直接跑电泳，还需要上样缓冲液么？

需要加。

9、CT 值出现太晚或检测为阴性

a. 扩增效率极低：优化反应条件，尝试三步法扩增程序。

b. 模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

c. 模板降解：重新制备模板，重复试验。

10、反应结束无扩增曲线出现

a. circRNA 在细胞株或组织中不表达：更换模板。

b. 反应循环数不够：一般设置循环数为 40，但需要注意的是过多的循环数会增加过多的背景信号，降低数值可信度。

c. 确认程序中是否设置了信号采集步骤：两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在 72℃延伸阶段。

d. 模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

e. 模板降解：重新制备模板，重复试验。

11、阴性对照也出现明显扩增

反应体系或水被污染：更换新的 Mix 或者水重复试验。反应体系在超净工作台内配置，减少气溶胶污染。

12、实验重复性差

a. 加样体积失准：使用性能较好的移液枪，扩大反应体积，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中。

b. 定量 PCR 仪不同位置温度控制不一致：定期校准仪器。

c. 模板浓度太低：模板浓度越稀，重复性越差，较少模板稀释度或者提高加样体积。

13、本产品是否可以 4℃储存

a. 不可以。4℃储存将会导致产品活性下降。

b. 该产品-20℃储存可以长期保持活性，推荐-20℃储存。

c. 因反复冻融也可能导致产品活性下降，因此当每次用量较小时，推荐小体积分装后-20℃储存。

B注意事项

1、本产品尽量避免反复冻融，以免酶活下降。如每次使用量较少，推荐小份分装使用。

2、使用前请上下颠倒混匀，请勿涡旋以免产生过多气泡引起反应体系失准，进而影响定量结果。混匀后轻微离心后即可使用。如操作不慎产生气泡，请再次离心后使用。

3、由于产品中的 2×qPCR SYBR Green Master Mix 含有荧光染料 SYBR Green I， 因此无论保存 Mix还是配置反应体系时都应该尽量避免强光照射。