T7低dsRNA高产量RNA合成试剂盒经过T7 RNA Polymerase突变体的筛选与转录反应体系的优化,以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板、NTPs为底物对启动子下游DNA序列进行转录,简单快速地获得大量RNA产物,同时产物中的dsRNA较低。T7低dsRNA高产量RNA合成试剂盒也能以修饰核苷为底物获得生物素、染料或放射性标记的RNA,以帽子结构或帽子类似结构为底物获得加帽的RNA。本试剂盒内含常用的修饰核苷N1-Me-pUTP供转录需求选择使用。
本试剂盒一个反应能够转录获得150~200μg的RNA产物,并可放大生产毫克级别的RNA。
转录合成的RNA可用于RNA结构和功能研究、RNase保护、探针杂交、anti-sense RNA和RNAi等应用,也可通过加帽加尾产生mRNA,用于体外翻译、转染等下游应用。
≤0℃运输;-25℃~-15℃条件下可保存一年;避免反复冻融。
1、转录产物产量低或转录失败
①可能是模板自身原因,建议重新纯化或线性化模板;
②重新确认模板定量及完整性;
③加大模板投入量;
2、产物电泳拖尾现象
①实验操作过程被 RNase 污染;②DNA 模板被 RNase 污染;
3、RNA 产物片段与预期不符
①质粒模板没有完全线性化;
②RNA 存在未完全变性的二级结构,建议使用变性胶检测 RNA 产物;
③模板 GC 含量高,可能形成高级结构;
④RNase 污染;
⑤模板序列中包含类似 T7 RNA 聚合酶终止序列,导致转录提前终止,建议尝试不同的 RNA聚合酶。