RNase检测试剂盒（荧光探针法）

产品简介

核糖核酸酶（RNases）是普遍存在于环境和许多生物材料中的一类酶。它们可以降解RNA，对许多涉及RNA的研究和生产过程造成影响。

RNase检测试剂盒基于荧光基团标记的RNA探针，当样本中不含RNase活性时，该探针稳定存在，不会产生荧光信号；当样本中含有RNase活性时，探针被降解，产生逐渐增强的荧光信号；荧光信号增加的速率与酶的数量和活性成正相关。用荧光酶标仪在ex/em=535/575nm波长下测定荧光信号增加倍数，判断样本是否被RNase污染。

储存运输条件及有效期

1）-25~-15℃运输；

2）试剂盒不同组分按如下温度分别储存：

名称                                                 储存温度

10×反应液                                       -25~-15℃

RNA探针                                         -25~-15℃

TE缓冲液                                        -25~-15℃

RNase A标准品 (10mg/mL)           -25~-15℃

标准品稀释液                                 -25~-15℃

无RNase水                                     -25~30℃  

RNase清除剂                                  2~30℃       

3）未开封试剂盒储存 12个月；开封后试剂盒储存6个月，RNA探针溶液建议根据单次使用量进行分装，避光储存，避免反复冻融。

产品特点

灵敏度高：检出限低至RNase A：0.313pg/mL，约1.56×10-9 U/μL，仅为进口同种试剂盒的1/8。

精密度高：批内CV≤10%，批间CV≤15% 。

稳定性好：低温避光，可长期稳定储存。

Q1：RNase检测试剂盒的反应温度和时间是怎样的？

请将反应体系置于37℃恒温条件下进行实验，反应时间为30分钟。

Q2：什么情况下可能出现假阳性或假阴性结果或定量结果不准确？

a.存在可能干扰荧光基团发光的物质，可能导致假阴性结果；

b.如果待测样本溶液中含有抑制RNA酶活性的物质，可能导致假阴性结果；

c.引起RNA探针化学性质不稳定性的溶液，可能导致假阳性或假阴性结果。

Q3：制备标准品溶液时，前面的步骤为什么要用标准品稀释液稀释而不是用无RNase水稀释？

因为标准品在标准品稀释液中比较稳定，即使多次稀释也不会改变它本身的活性。如果用水稀释，多步操作可能会造成标准品的活性改变，标准曲线产生偏差。

Q4：如何调节合适的酶标仪增益值？

如您的酶标仪有自动增益选项，则选用自动增益。如您的酶标仪没有自动增益选项，则根据增益值范围先设置中间值，然后根据反应后阳性对照孔（79μL无RNase水+1μL RNase A标准品）的荧光值来调节合适的增益值：如超过仪器上限，则适当降低增益值，如远低于仪器上限，则适当调高增益值。

Q5：为什么严重污染的样本可能会出现假阴性的结果？

判定RNase污染的标准是：RFU30(待测样本)≥2×RFU0（待测样本），即反应30分钟时的RFU值达到0分钟的RFU值的2倍以上。如果样本被严重污染，则有可能反应开始时速度很快，在非常短的时间测到一个很高的RFU0值，出现RFU30（待测样本）＜2×RFU0（待测样本）的假阴性结果。此时需要用无RNase水来稀释待测样本。

Q6：阴性对照RFU值不为0，就说明阴性对照被污染了吗？

不一定。阴性对照通常也能够测到较低的RFU值，但不会随着反应时间的延长而RFU值显著增加，一般认为30分钟的RFU30小于0分钟的RFU0的2倍就说明阴性对照没有被污染。