T7高产量RNA合成试剂盒

产品简介

T7高产量RNA合成试剂盒使用T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）进行体外转录，以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板、NTPs为底物对启动子下游DNA序列进行转录，使客户能够简单快速地获得大量RNA产物。本试剂盒也能以修饰核苷为底物获得生物素、染料或放射性标记的RNA，以帽子结构或帽子类似结构为底物获得加帽的RNA。本试剂盒内含常用的修饰核苷供转录需求选择使用。

应用场景

转录合成的RNA可用于RNA结构和功能研究、RNase保护、探针杂交、anti-sense RNA和 RNAi等应用，也可通过加帽加尾产生mRNA，用于体外翻译、转染等下游应用。

运输与保存方法 

≤0℃运输；-25℃~-15℃保存。

1、转录产物产量低或转录失败

模板的质量与产量密切相关，实验组产量明显低于对照组可能原因有：①可能是模板自身原因；②实验模板中有抑制反应的成分。

建议：①重新纯化模板；②确定模板定量以及其完整性；③延长反应时间；④加大模板投入量；⑤尝试其它的启动子和RNA聚合酶。

2、产物电泳拖尾现象

可能原因有：①实验操作过程被RNase污染；②DNA模板被RNase污染。

建议：①实验过程中使用RNase-free的枪头和EP管，佩戴一次性乳胶手套和口罩，所有试剂均用RNase free H2O 配制；②重新纯化模板DNA。

3、RNA转录长度大于预期

如果电泳后的条带大于目标条带，可能原因有：①质粒模板没有完全线性化；②RNA存在未完全变性的二级结构；③有义链3'端为突出结构。

建议：①确认模板结构，检查模板是否完全线性化，如有必要，额外进行线性化；②将电泳方式由琼脂糖胶换成变性胶来检测RNA产物。

4、RNA转录长度小于预期

如果电泳后的条带小于于目标条带，可能原因有：①模板序列中包含类似于T7 RNA聚合酶的终止序列；②模板中GC含量高形成高级结构。

建议：①降低反应温度（比如，30℃），有时降低温度可以增加转录长度，但会降低产量；②不同的聚合酶识别不同的终止序列，若模板中含终止结构，建议尝试不同的 RNA 聚合酶；③若模板GC含量高，采用42℃进行转录反应，或者添加SSB蛋白提高转录效率。