RIP试剂盒用完了都没好结果？这些“坑”你踩了吗

“天呐！我那学生RIP实验做了很久都没做明白，也没做出结果！”

最近有位老师咨询RIP实验，

详细了解后才发现，

是学生踩了几个RIP实验的“坑”。

在RIP实验体系中，WB验证可作为关键质控步骤，特别是在结果异常时，其意义尤为显著：

● 抗体功能验证：确认靶蛋白抗体的特异性识别能力；

● 靶蛋白验证：确证实验样本中目标蛋白丰度；

● 富集验证：评估免疫沉淀效率，排除实验操作失误；

● 互作验证前提：明确靶蛋白的富集，为后续检测RNA分析分子互作提供基础。

市面上部分RIP试剂盒操作指南未纳入该质控步骤，因而容易被忽略；而吉赛生物RIP试剂盒中对靶蛋白WB验证步骤有明确说明和指示，并新增从磁珠上洗脱蛋白步骤用到的Loading buffer试剂，使蛋白质-RNA互作验证更严谨。

RIP实验富集靶蛋白结合的微量RNA，因此传统Trizol法提取RNA可能存在挑战：①RNA沉淀不完全；②肉眼难以看到微量沉淀，离心弃上清时容易损失RNA。总之，Trizol法可能导致RNA回收率较低，实验可重复性较差。

因此建议采用微量RNA提取法分析RIP实验的RNA产物。吉赛生物RIP试剂盒整合了柱式法RNA提取的试剂，以提高RIP实验成功率：

● RNA回收率和纯度更高；

● 无需繁琐的步骤，操作更简便；

● 配有相应纯化柱及试剂，降低实验成本。

RIP的RNA产物量较少，可能导致直接检测浓度数据不准确。因此测到浓度很低或者测不到浓度，这不一定就是实验失败，建议接着进行RT-qPCR验证。

● 若Input组产物无信号，可能目的基因内源表达量较低，建议考虑过表达后再做RIP。

● 若WB验证成功后，IP组无信号，可考虑增加细胞量，如从1×10^7个细胞增加到2×10^7或3×10^7个细胞。

IP实验（RIP/ChIP/Co-IP）一般建议设置IgG同型对照组，利用与靶蛋白抗体相同种属、剂量、浓度、类型的lgG同时在相同样本中进行相同操作的IP实验，可提高实验严谨性：

特异性验证：排除Fc受体或其它蛋白相互作用导致的抗体非特异性结合。如果靶蛋白质只在IP组中被富集，而在IgG组中未被富集，说明靶蛋白的富集是特异的；如果IgG组富集较多靶蛋白，则可判定靶蛋白的富集特异性较差，实验结果需要谨慎解读。

背景校正：IgG组的目的RNA富集量作为背景信号，排除背景信号计算IP组对目的RNA的富集，提升数据的可靠性；还可作为阴性对照协助判断蛋白-RNA互作。

因此，仅进行靶蛋白抗体的IP组实验，省略IgG组对照，可能导致结果缺乏严谨性，甚至无法评估。为进一步强调IgG组的重要性，吉赛生物RIP、Co-IP试剂盒全面新增IgG试剂组分，帮助用户更完整和便利地完成IP实验！

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规避上述实验误区后，结合可靠RIP试剂盒可显著提升实验成功率。吉赛RIP试剂盒以操作方便、成分完整、捕获效率高、重复性好等优势，已帮助众多科研工作者完成大量创新且高质量的研究。

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