外泌体(Exosome)是真核细胞内体中产生的细胞外囊泡(EV),直径约为30-150 nm,具有双层膜,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和细胞培养基等生物体液中。外泌体携带有很多的遗传物质和参与细胞活动调控的重要蛋白,可通过自分泌或旁分泌途径被细胞吸收,也可经循环系统被远距离靶组织或器官所吸收,参与各种正常和病理功能的细胞间通讯,在生命科学研究和生物技术中引起了人们的关注。外泌体能够通过生物屏障,在细胞间传递功能性核酸分子,从而发挥各种生物学功能,有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。
图1 不同类型细胞的外泌体[1]
一、外泌体提取与鉴定
① 使用外泌体提取试剂盒提取外泌体。
② 纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA):快速实时动态检测提取得到的外泌体的颗粒粒径、散射光强、浓度等,分析外泌体的粒径大小、数量和质量。
图2 NTA检测外泌体粒径
③ 透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope, TEM):检测外泌体的双层囊膜结构(亚显微结构)和形态。
图3 TEM检测外泌体形态
④ Western Blot:提取外泌体总蛋白, WB检测外泌体常见指标:CD63/ CD81/ CD9/ TGS101/ HSP70 /Alix等。
图4 WB检测外泌体标志CD81[2]
相关技术服务
外泌体提取、电镜TEM、粒径NAT、WB
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二、外泌体内容物研究
外泌体内可能含有DNA、mRNA、miRNA、ncRNA、蛋白质和小分子代谢物等,可利用转录组学、蛋白组学、表观组学、代谢组学的研究手段对外泌体内容物进行定量和定性分析。
相关服务
外泌体蛋白分析:DIA蛋白质组、Label free蛋白质组
外泌体修饰蛋白分析:磷酸化labelfree
外泌体代谢分析:非靶代谢、脂质组
外泌体转录分析:Exosome RNA-seq、miRNA-seq
案例文献
[1] Lai JJ et al. Exosome Processing and Characterization Approaches for Research and Technology Development. Adv Sci (Weinh). 2022 May;9(15):e2103222.
[2] Qiu Z et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomal miR-335-5p attenuates the inflammation and tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation of renal tubular epithelial cells by reducing ADAM19 protein levels. Stem Cell Res Ther. 2022, 13(1):373.