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    除了常规的mRNA可翻译蛋白外,在circRNA和lncRNA中也预测到具有翻译的能力。吉赛生物可提供T系列载体构建和表达验证服务,验证“非编码RNA”是否具备翻译功能,助力机制研究。


    circRNA翻译验证载体示意图


    T1: circRNA-OE(circRNA过表达载体)

    使用吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体进行构建,利用载体携带的侧翼成环框架(IR)使插入的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测,保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。


    T2:circRNA-3xFlag(含3xFlag标签的circRNA过表达载体)

    circRNA-OE载体的基础上,于预测ORF的终止密码子前添加3xFlag标签序列,利用载体携带的侧翼成环框架(IR)使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测,保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。


    T3:circRNA-3xFlag-△ATG(含3xFlag标签并突变ATG的circRNA过表达载体)

    circRNA-3xFlag载体的基础上,突变预测ORF的起始密码子ATG,利用载体携带的侧翼成环框架(IR)使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。


    T4:circRNA-3xFlag-NC(含3xFlag标签并删除下游IR的载体,即不能成环的阴性对照)

    circRNA-3xFlag载体的基础上,删除载体下游的成环框架(IR),使能转录生成与circRNA-3xFlag相同的RNA序列但不剪切成环。该载体可作为阴性对照使用。


    T5:circRNA-3xFlag-**aa(预测ORF的线性表达载体,即**aa的阳性对照)

    使用与吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体相同骨架(不含成环框架)的载体进行构建,插入预测的ORF全长,使能转录生成线性化的ORF全长序列,并能正常翻译生成预测的多肽**aa。该载体可作为阳性对照使用。



    客户提供

     

    1. 基因ID/物种/全长序列

    2. 载体名称



    我们提供

     

    1. T系列翻译质粒(可选:T1-T5);

    2. 目的载体:10μg质粒+200μL甘油菌;

    3. 对照载体:10μg质粒+200μL甘油菌;

    4. 载体构建与验证实验报告:

    ① 载体构建步骤;

    ② 载体测序验证结果原始文件;

    ③ 细胞转染实验步骤;

    ④ qPCR实验流程方案及产物测序;

    ⑤ 载体构建与验证实验报告。




  • 案例1:


    参考文献:

    Song R, Guo P, Ren X, Zhou L, Li P, Rahman NA, Wołczyński S, Li X, Zhang Y, Liu M, Liu J, Li X. A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer. Mol Cancer. 2023 Jul 5;22(1):104. doi: 10.1186/s12943-023-01806-x. PMID: 37408008; PMCID: PMC10320902.



    案例2:


    参考文献:

    Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. A novel protein encoded by circHNRNPU promotes multiple myeloma progression by regulating the bone marrow microenvironment and alternative splicing. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8;41(1):85. doi: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID:35260179; PMCID: PMC8903708.




  • Q: T3载体构建,只突变起始密码子ATG不删除后面的ATG会有影响吗?

    A:现有文章都是使用突变以减少对蛋白结构的改变,后续其他ATG删除的话会大大影响蛋白的结构,可能会引起不必要的改变。而且翻译是很复杂的机制,并不是遇见ATG就起始翻译,还需要其他序列协助才可以。

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