RNA翻译研究

服务介绍

除了常规的mRNA可翻译蛋白外，在circRNA和lncRNA中也预测到具有翻译的能力。吉赛生物可提供T系列载体构建和表达验证服务，验证“非编码RNA”是否具备翻译功能，助力机制研究。

circRNA翻译验证载体示意图

T1： circRNA-OE（circRNA过表达载体）

使用吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体进行构建，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测，保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。

T2：circRNA-3xFlag（含3xFlag标签的circRNA过表达载体）

在circRNA-OE载体的基础上，于预测ORF的终止密码子前添加3xFlag标签序列，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测，保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。

T3：circRNA-3xFlag-△ATG（含3xFlag标签并突变ATG的circRNA过表达载体）

在circRNA-3xFlag载体的基础上，突变预测ORF的起始密码子ATG，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。

T4：circRNA-3xFlag-NC（含3xFlag标签并删除下游IR的载体，即不能成环的阴性对照）

在circRNA-3xFlag载体的基础上，删除载体下游的成环框架（IR），使能转录生成与circRNA-3xFlag相同的RNA序列但不剪切成环。该载体可作为阴性对照使用。

T5：circRNA-3xFlag-**aa（预测ORF的线性表达载体，即**aa的阳性对照）

使用与吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体相同骨架（不含成环框架）的载体进行构建，插入预测的ORF全长，使能转录生成线性化的ORF全长序列，并能正常翻译生成预测的多肽**aa。该载体可作为阳性对照使用。

客户提供

1. 基因ID/物种/全长序列

2. 载体名称

我们提供

1. T系列翻译质粒（可选：T1-T5）；

2. 目的载体：10μg质粒+200μL甘油菌；

3. 对照载体：10μg质粒+200μL甘油菌；

4. 载体构建与验证实验报告：

①　载体构建步骤；

②　载体测序验证结果原始文件；

③　细胞转染实验步骤；

④　qPCR实验流程方案及产物测序；

⑤　载体构建与验证实验报告。

案例1：

参考文献：

Song R, Guo P, Ren X, Zhou L, Li P, Rahman NA, Wołczyński S, Li X, Zhang Y, Liu M, Liu J, Li X. A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer. Mol Cancer. 2023 Jul 5;22(1):104. doi: 10.1186/s12943-023-01806-x. PMID: 37408008; PMCID: PMC10320902.

案例2：

参考文献：

Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. A novel protein encoded by circHNRNPU promotes multiple myeloma progression by regulating the bone marrow microenvironment and alternative splicing. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8;41(1):85. doi: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID:35260179; PMCID: PMC8903708.