RNA、蛋白定位

服务介绍

FISH（fluorescence in situ hybridization）：一种非放射性原位杂交技术。通过设计同源互补的双链DNA探针（可标记生物素、地高辛和荧光CY3/FITC），二者经变性－退火－复性，即可结合到靶核酸上，再通过间接免疫化学反应或直接荧光检测，对mRNA、lncRNA、circRNA和miRNA进行定性、半定量或定位分析的一种实验方法。

免疫荧光（IF）：以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术。用于检测或定位细胞或者组织中目的蛋白。

吉赛生物可提供

1. 基因或蛋白单独定位检测；

2. 基因与基因共定位检测；

3. 基因与蛋白共定位检测；

4. 蛋白与蛋白共定位检测。

技术优势

1. 安全、快速、重复性好；

2. 特异性100%，灵敏度超过90%；

3. 探针性能稳定，可低温保存1年以上；

4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；

5. 操作简单，定位精准，无实验污染。

客户提供

1. 基因名称（ID）、长度、序列、物种（mRNA、LncRNA指定具体转录本、miRNA指定5p或者3p）；

2. 合成好的探针或者指定标记探针方法（地高辛/生物素/CY3/FITC）；

3. 新鲜或者固定好的组织或细胞样本，石蜡切片，冰冻切片以及细胞爬片，涂片；

4. 一抗及一抗信息。

我们提供

1. 探针；

2. 探针序列报告；

3. 基因单独/共定位检测报告。

案例1：

2021年2月18日，广东医科大学徐军发教授和美国University of Illinois College of Medicine的Zheng W. Chen教授作为通讯作者在Clinical & Translational Immunology杂志上发表了一篇题为“Circular RNA TRAPPC6B inhibits intracellular Mycobacterium tuberculosis growth while inducing autophagy in macrophages by targeting microRNA-874-3p”的文章，揭示了环状RNA TRAPPC6B通过靶向miR-874-3p调控巨噬细胞自噬，发挥抗结核固有免疫的功能。

图1：miR-874-3p被确定为circTRAPPC6B的靶标

本研究中，通过circinteractome，miRDB和RegRNA2三个工具预测分析表明miR-874-3p是circTRAPPC6B可能结合的miRNA。FISH分析发现circTRAPPC6B和miR-874-3p主要分布于巨噬细胞胞质，且存在共定位。双荧光素酶报告基因检测，RNA pull down实验分析进一步确认了circTRAPPC6B和miR-874-3p的结合。[1]

案例2：

图2：FISH 分析 hsa_circ_0004872 和 miR-224 在 GC 细胞中的亚细胞定位

在本研究中，FISH 分析显示 hsa_circ_0004872 与 miR-224 共定位在 胃癌（GC） 细胞的细胞质中。结合双荧光素酶报告基因分析证实了 hsa_circ_0004872 和 miR-224 在 GC 细胞中的共定位和相互作用。并进一步通过其它多项实验证明hsa_circ_0004872 通过形成由 hsa_circ_0004872/miR-224/Smad4/ADAR1 组成的负调控环，在 胃癌（GC） 中充当肿瘤抑制因子。[2]

参考文献：

[1] Luo HL, Pi J, Zhang JA, Yang EZ, Xu H, Luo H, Shen L, Peng Y, Liu GB, Song CM, Li KY, Wu XJ, Zheng BY, Shen HB, Chen ZW, Xu JF. Circular RNA TRAPPC6B inhibits intracellular Mycobacterium tuberculosis growth while inducing autophagy in macrophages by targeting microRNA-874-3p. Clin Transl Immunology. 2021 Feb 18;10(2):e1254.

[2] Circular RNA hsa_circ_0004872 inhibits gastric cancer progression via the miR-224/Smad4/ADAR1 successive regulatory circuit. Mol Cancer. 2020 Nov 10; 19: 157.