服务介绍
Exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能，有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。吉赛生物自主研发外泌体提取试剂盒，能够快速分离提取exosome RNA进行建库测序，满足外泌体mRNA，lncRNA，circRNA，miRNA的不同研究需求。
外泌体RNA测序技术路线
测序方案
分析对象：mRNA+lncRNA+circRNA
测序平台：Illumina Novaseq 6000/NovaSeq X Plus
测序模式：PE150
测序数据量：10 Gb raw data
分析对象：miRNA
测序平台：Illumina Novaseq 6000
测序模式：PE150
测序数据量：10 M raw reads
生物信息分析
外泌体全转录组测序丨Exo-RNA-seq(mRNA+lncRNA+circRNA)
基础分析
原始数据质控检查
比对结果质控检查
基因覆盖度分析
基于基因表达的样品主成分分析
基因表达分析
circRNA预测及鉴定
长链非编码RNA的识别
高级分析
差异基因表达分析
差异基因GO功能分析
差异基因KEGG通路分析
差异基因Rectome通路分析
针对mRNA基因的GSEA分析
circRNA差异分析
差异circRNA宿主基因的GO功能分析
差异circRNA宿主基因的KEGG通路分析
差异circRNA宿主基因的Rectome通路分析
差异circRNA的靶向miRNA预测分析
差异circRNA及靶向miRNA网络调控制图
长链非编码RNA的识别
长链非编码RNA差异分析
差异lncRNA顺式调控基因的GO功能分析
差异lncRNA顺式调控基因的KEGG通路分析
差异lncRNA顺式调控基因的Rectome通路分析
外泌体miRNA测序丨Exo-miRNA-seq
基础分析
原始数据质控检查
比对结果质控检查
RNA种类分析统计
miRNA表达分析
基于miRNA表达的样品主成分分析
miRNA差异分析
差异 miRNA 靶基因预测
差异 miRNA 靶基因的GO功能分析
差异 miRNA 靶基因的KEGG通路分析
差异 miRNA 靶基因的Rectome通路分析
高级分析
差异miRNA与差异表达基因调控分析
差异miRNA与差异表达基因网络绘图
Table1. 外泌体测序原始样本送样建议
送样类型 | 送样量 | 备注 |
细胞上清 | ≥30mL | 无支原体污染 |
血清、血浆 | ≥4mL |
Table2. 外泌体测序样本送样建议
送样类型 | 测序类型 | 送样量 | 完整性（RIN值） | 浓度 | 纯度 |
血清血浆、细胞上清、外泌体RNA | exo-RNA-seq | ≥20ng | / | / | 无DNA，蛋白/盐离子等污染，样本无色透明不粘稠 |
exo-miRNA-seq | ≥10ng | / | / |
*更具体的送样方法请详询销售或技术支持
物种范围：人、小鼠、大鼠等哺乳动物，拟南芥、水稻、番茄、玉米、大豆等植物，其他物种详询销售或技术支持
Q1：外泌体全转录组测序，提取出来的RNA有100~200ng。是采用微量建库的方法建库，还是常规建库方法建库呢？
A1：如果提取出来的RNA量超过100ng，建议采用常规去rRNA链特异方法，用100ngRNA进行全转录组建库。相对来说，建库input的模板量越大，基因信息的覆盖度越高。微量建库方法是在样本量较少的情况下采用的建库方法，在可以的情况下，尽量采用常规建库方法进行实验。
Q2：外泌体研究，应选用血浆还是血清？
A2：血清是血液凝固之后收集的液体，其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。
血浆=血液-血细胞
血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子
所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，血清更适合。
