服务介绍
除了常规的mRNA可翻译蛋白外，在circRNA和lncRNA中也预测到具有翻译的能力。吉赛生物可提供T系列载体构建和表达验证服务，验证“非编码RNA”是否具备翻译功能，助力机制研究。
circRNA翻译验证载体示意图
T1： circRNA-OE（circRNA过表达载体）
使用吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体进行构建，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测，保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。
T2：circRNA-3xFlag（含3xFlag标签的circRNA过表达载体）
在circRNA-OE载体的基础上，于预测ORF的终止密码子前添加3xFlag标签序列，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。包含细胞转染和qRT-PCR检测，保证插入的circRNA序列准确剪切成环过表达。
T3：circRNA-3xFlag-△ATG（含3xFlag标签并突变ATG的circRNA过表达载体）
在circRNA-3xFlag载体的基础上，突变预测ORF的起始密码子ATG，利用载体携带的侧翼成环框架（IR）使插入的含3xFlag标签的circRNA序列准确剪切成环表达。
T4：circRNA-3xFlag-NC（含3xFlag标签并删除下游IR的载体，即不能成环的阴性对照）
在circRNA-3xFlag载体的基础上，删除载体下游的成环框架（IR），使能转录生成与circRNA-3xFlag相同的RNA序列但不剪切成环。该载体可作为阴性对照使用。
T5：circRNA-3xFlag-**aa（预测ORF的线性表达载体，即**aa的阳性对照）
使用与吉赛生物专利技术的第五代circRNA过表达载体相同骨架（不含成环框架）的载体进行构建，插入预测的ORF全长，使能转录生成线性化的ORF全长序列，并能正常翻译生成预测的多肽**aa。该载体可作为阳性对照使用。
客户提供
1. 基因ID/物种/全长序列
2. 载体名称
我们提供
1. T系列翻译质粒（可选：T1-T5）；
2. 目的载体：10μg质粒+200μL甘油菌；
3. 对照载体：10μg质粒+200μL甘油菌；
4. 载体构建与验证实验报告：
① 载体构建步骤；
② 载体测序验证结果原始文件；
③ 细胞转染实验步骤；
④ qPCR实验流程方案及产物测序；
⑤ 载体构建与验证实验报告。
案例1：
参考文献：
Song R, Guo P, Ren X, Zhou L, Li P, Rahman NA, Wołczyński S, Li X, Zhang Y, Liu M, Liu J, Li X. A novel polypeptide CAPG-171aa encoded by circCAPG plays a critical role in triple-negative breast cancer. Mol Cancer. 2023 Jul 5;22(1):104. doi: 10.1186/s12943-023-01806-x. PMID: 37408008; PMCID: PMC10320902.
案例2：
参考文献：
Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. A novel protein encoded by circHNRNPU promotes multiple myeloma progression by regulating the bone marrow microenvironment and alternative splicing. J Exp Clin Cancer Res. 2022 Mar 8;41(1):85. doi: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID:35260179; PMCID: PMC8903708.
Q： T3载体构建，只突变起始密码子ATG不删除后面的ATG会有影响吗？
A：现有文章都是使用突变以减少对蛋白结构的改变，后续其他ATG删除的话会大大影响蛋白的结构，可能会引起不必要的改变。而且翻译是很复杂的机制，并不是遇见ATG就起始翻译，还需要其他序列协助才可以。
